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饲用高活性干酵母的检测方法
作者:bsf 文章来源:原创 点击数:5956 更新时间:2014-1-20 14:35:34
 

酵母菌总数测定
1.1仪器

血球计数板、生物显微镜、分析天平。

1.2分析步骤

称取试样10.0g加水稀释至100ml,充分摇匀(摇时可加入数十粒小玻璃球以便使样品中的细胞充分分散)吸取1ml再稀释10或100倍(稀释倍数应以血球计数板的每小格内含有1~2个酵母细胞为宜)取一干净的血球计数板,将盖玻片置于计数板上。用吸管吸取稀释后的菌液,加1滴于盖玻片边缘菌液自行渗入,充满整个计数室 静置1~2min,使细胞全部沉降至计数板表面, 用生物显微镜计数

1.3计算

X=(A×400×104×D)/(n×m×104)=(A×4×D)/(n×m×102)

 

式中:X—试样的酵母菌总数,亿个/g;

n一所数得小格数;

A一n个小格内酵母菌的总数,个;

D一试样的稀释倍数;

m一试样的质量,(以干物质计)g;

400一血球计数板上总的小格数;

10一相当于计数室容积扩大为1ml时换算系数。

2、活细胞数测定
2.1仪器设备

分析天平、高压灭菌锅、培养箱、平皿、吸管、三角瓶、试管架、橡皮乳头。

2.2培养基

稀释液配制:NaCl8.5g、蛋白胨1.0g、水1000ml溶解后分装,121℃高压灭菌30min。

计数用培养基配制:蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、无水D-葡萄糖1.0g、琼脂15.0g,水1000ml,将上述成分加热溶解,分装在三角瓶中,121℃高压灭菌20min。

2.3试样稀释及培养

无菌称取试样10.0g,放入含有90ml稀释液的灭菌三角瓶中摇匀制成1:10 的稀释液 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml沿壁慢慢注入含有9ml稀释液的试管中(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)。混合均匀,制成1:100的稀释度。

另取一支1ml无菌吸管,按上述操作顺序作10倍递增稀释。.如此每递增稀释一次,即更换一支吸管。

根据活细胞数值估计是选择3~4个适宜稀释度。分别在做10倍递增稀释的同时取1ml稀释于灭菌平皿内, 每个稀释度作两个平皿。稀释液移平皿后,应及时将凉至47℃的计数用培养基注入平皿约15ml,小心转动平皿,使试样与培养基充分混匀。待琼脂凝固后,倒置平皿于30℃培养箱内,每个活细胞将长出一个菌落。培养48h,取出计数。菌落数乘以稀释倍数 即得出每克试样所含活细胞数。

2.4菌落计数方法

作平板菌落计数时,可用肉眼观察,必要时借助于放大镜检查,以防遗漏,选择菌落数在30~300之间的平板作为菌落计数标准,每一稀释度采用两个平板菌落的平均数。

3、活细胞比例计算
活细胞百分比=((活细胞数个/g)/(酵母细胞总数个/g))×100

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